直接貼壁法誘導人胚胎干細胞分化為心肌細胞_《中國胸心血管外科臨床雜志》

作者：

穆軍升 , 李獻帥 , 袁樹民 , 張健群 , 伯平

1.首都醫科大學附屬北京安貞醫院心臟外科，北京 100029;;
2.中科院動物研究所生物膜與膜生物工程國家重點實驗室，北京 100101;

關鍵詞：

人胚胎干細胞　分化　心肌細胞　貼壁法

DOI：

10.7507/1007-4848.20130175

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目的　利用直接貼壁法體外誘導人胚胎干細胞分化為心肌細胞，并檢測其分化效率。方法人胚胎干細胞以1×105個/cm2的細胞密度傳代到鋪備有基質膠的培養皿中培養，用帶8 ng/ml堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）的條件培養基培養6 d后，更換為RPMI 1640-B27培養基，同時加入100 ng/ml的人重組activin A處理24 h，接著再加入10 ng/ml的人重組骨形態發生蛋白4 （BMP4）處理4 d，之后更換為不帶誘導因子的RPMI 1640-B27培養基，每隔2～3 d換1次培養基，持續2～3周。在光學顯微鏡下觀察記錄出現跳動心肌細胞的時間和跳動頻率，并計算跳動克隆百分比，24孔板一組，共記錄4組96孔；用免疫熒光染色法檢測心肌細胞特異標志物心肌肌鈣蛋白T （cTnT）；膜片鉗實驗檢測心肌細胞自發性動作電位；跳動心肌細胞經過24 h缺氧刺激后，用凋亡試劑盒檢測心肌細胞凋亡比例。結果大量的自發跳動心肌細胞在誘導分化13 d左右開始出現。分化出現自發跳動心肌細胞的時間為（13.0±1.1） d，百分比為66.7%，跳動頻率為（63.0±7.0）次/分；跳動心肌細胞cTnT染色陽性；跳動心肌細胞檢測到自發性動作電位；跳動心肌細胞缺氧24 h后檢測到凋亡比率為8.0%±0.5%。結論國內首次利用直接貼壁法在體外誘導人胚胎干細胞分化為心肌細胞，分化效率達到66.7%，分化時間13 d左右。

引用本文： 穆軍升,李獻帥,袁樹民,張健群,伯平. 直接貼壁法誘導人胚胎干細胞分化為心肌細胞. 中國胸心血管外科臨床雜志, 2013, 20(5): 564-569. doi: 10.7507/1007-4848.20130175 復制

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