大鼠BMSCs 體外誘導培養后連接蛋白40 及超極化激活環核苷酸門控陽離子通道4 表達的初步研究_《中國修復重建外科雜志》

作者：

宋波 ^1# , 廖斌 ¹ , 于風旭 ¹ , 夏增亮 ²

1 瀘州醫學院附屬醫院胸心外科（四川瀘州，646000）;;
2 四川大學華西分子遺傳學實驗室;

關鍵詞：

BMSCs ，竇房結細胞，混合培養，連接蛋白40 ，超極化激活環核苷酸門控陽離子通道4，大鼠

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【摘要】目的觀察大鼠BMSCs 與竇房結組織塊混合誘導培養后連接蛋白40（connexin 40，Cx40）及超極化
激活環核苷酸門控陽離子通道4（hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel 4，HCN4）的表達情況，
探討大鼠BMSCs 向竇房結細胞誘導分化的可能性。方法 4 ～ 6 周齡SD 大鼠20 只，雌雄不限，體重200 ～ 300 g。取
6 只SD 大鼠，采用貼壁篩選法分離BMSCs，取第3 代細胞以羧基熒光素二乙酸鹽琥珀酰亞胺酯標記后，接種于6 孔培養
板內，同時制作細胞爬片。取14 只SD 大鼠竇房結組織，剪成0.3 cm × 0.3 cm 大小組織塊，與標記后的第3 代BMSCs 混
合培養，作為實驗組；對照組僅單獨培養第3 代BMSCs。對照組培養1 周及實驗組混合培養1、2、3 周，采用免疫組織化
學方法檢測Cx40 和HCN4 表達，并采用Image pro plus 5.0 圖像分析軟件檢測各組細胞表達Cx40 和HCN4 的平均積分
吸光度值（mean integrated absorbance，MIA）；采用實時熒光定量PCR 檢測細胞Cx40 及HCN4 mRNA 表達水平。結
果免疫組織化學染色檢測示，實驗組混合培養1、2、3 周，Cx40 和HCN4 MIA 值均顯著高于對照組（P lt; 0.01）；且實
驗組隨培養時間延長，Cx40 和HCN4 MIA 值均逐漸增加，各時間點間差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。實時熒光定量
PCR 檢測示，實驗組混合培養后1、2、3 周，Cx40 和HCN4 mRNA 表達水平均顯著高于對照組（P lt; 0.01）；實驗組隨培
養時間延長，Cx40 和HCN4 mRNA 表達水平均逐漸增加，各時間點間差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。結論將大鼠
BMSCs 與竇房結組織塊體外混合培養，誘導后細胞高表達Cx40 及HCN4，具有向竇房結細胞分化的可能。

引用本文： 宋波 ,廖斌,于風旭,夏增亮. 大鼠BMSCs 體外誘導培養后連接蛋白40 及超極化激活環核苷酸門控陽離子通道4 表達的初步研究. 中國修復重建外科雜志, 2012, 26(2): 146-151. doi: 復制

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《中國修復重建外科雜志》

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