多藥耐藥真核表達載體的構建及其生物學特性_《中國普外基礎與臨床雜志》

作者：

王新平 ¹ , 嚴律南 ¹ , 潘光棟 ¹ , 夏冬 ¹ , 張明滿 ¹ , 茍興華 ² , 趙蘭英 ²

1.四川大學華西醫院普外科（成都610041);;
2.成都地奧制藥集團有限公司新藥部（成都610041）;;
通迅作者：嚴律南;

關鍵詞：

多藥耐藥多藥耐藥相關蛋白人肝癌細胞質粒

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目的構建攜帶多藥耐藥相關蛋白(MRP)全長基因的真核表達載體，并研究其在人肝癌細胞株HepG2中的表達特性。
方法雙酶切克隆質粒pGEM-mrp1，獲得含mrp1全長的cDNA片段，再將此片段定向克隆到哺乳動物真核表達載體pCI-neo的多克隆位點，經脂質體法轉染HepG2細胞，G418篩選獲得穩定表達的轉基因細胞系HepG2/mrp1。RT-PCR檢測HepG2/mrp1細胞mrp1 mRNA表達，流式細胞儀檢測HepG2/mrp1細胞MRP的含量。
結果本實驗所構建的攜帶mrp1全長基因的表達載體pCI-mrp1能在HepG2細胞中表達，形成穩定的多藥耐藥細胞系HepG2/mrp1，其多藥耐藥性、MRP含量及mrp1 mRNA表達均較未轉染該載體的HepG2細胞顯著增加。結論將攜帶全長人多藥耐藥相關蛋白基因mrp1的載體導入人肝癌細胞株能夠建立高效、穩定的多藥耐藥細胞株，為進一步研究多藥耐藥的機理及逆轉多藥耐藥提供理想的細胞模型。

引用本文： 王新平,嚴律南,潘光棟,夏冬,張明滿,茍興華,趙蘭英. 多藥耐藥真核表達載體的構建及其生物學特性. 中國普外基礎與臨床雜志, 2006, 13(2): 163-166. doi: 復制

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