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      華西醫學期刊出版社
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      • 腫瘤特異性結核抗原Ag85A基因慢病毒表達載體構建

        目的構建小鼠端粒酶催化亞單位啟動子(murine telomerase catalytic subunit promoter,PmTERT)調控的結核桿菌抗原基因Ag85A腫瘤特異性慢病毒表達載體,為腫瘤靶向性免疫基因治療的研究奠定基礎。 方法用聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)方法克隆PmTERT,用熒光素酶(luciferase)活性檢測方法研究PmTERT在小鼠和人腫瘤細胞及正常細胞中的轉錄活性。通過核酸分子克隆方法,分別構建巨細胞病毒(cytomegalo virus,CMV)啟動子和PmTERT調控的Ag85A基因慢病毒表達載體,并用基因測序和Western blot方法對重組載體進行鑒定。 結果本研究克隆的331 bp大小的PmTERT在小鼠Lewis肺癌細胞、人A549肺癌細胞、EC-109食管癌細胞中均有轉錄活性,在小鼠NIH3T3胚胎成纖維細胞和人MRC-5胚腎成纖維細胞中無轉錄活性;成功構建分別由CMV啟動子和PmTERT調控的Ag85A基因慢病毒表達載體pLVX-Ag85A-CMV和pLVXAg85A-PmTERT;感染pLVX-Ag85A-CMV的Lewis細胞和NIH3T3細胞均有Ag85A蛋白表達,感染pLVX-Ag85APmTERT的Lewis細胞有Ag85A表達,感染pLVX-Ag85A-PmTERT的NIH3T3細胞無g85A表達。 結論PmTERT具有腫瘤特異性轉錄活性,其驅動的結核桿菌抗原基因可以在腫瘤細胞中靶向性表達。

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      小泉真希