目的 通過負載黃腐酚研發一種具有抗炎功能的聚乳酸-羥基乙酸［poly（lactic-co-glycolic acid），PLGA］支架，探討其在羊體內抗炎及促進軟骨再生的效果。方法 取PLGA采用致孔劑浸出法制備多孔支架后，將其置于黃腐酚溶液24 h，制備黃腐酚-PLGA支架（以下簡稱“載藥支架”）。取PLGA支架及載藥支架以掃描電鏡觀測支架孔徑、液體置換法計算孔隙率、傅里葉變換紅外（Fourier transform infrared，FTIR）光譜儀驗證支架上黃腐酚負載情況；并與經脂多糖炎癥誘導處理的RAW264.7巨噬細胞共培養24 h，RT-PCR和Western blot檢測炎癥因子（IL-1β、TNF-α）表達，評價其體外抗炎性能。取成年山羊骨髓，采用貼壁法分離培養BMSCs并傳代；取第2代細胞分別接種于兩種支架構建BMSCs-支架復合物，通過活/死細胞染色及細胞計數試劑盒8（cell counting kit 8，CCK-8）觀察支架細胞相容性。將BMSCs-支架復合物體外培養6周后，通過大體觀察、組織學染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色以及生化分析驗證BMSCs-載藥支架體外再生軟骨的可行性。最后，將體外培養6周后的兩種BMSCs-支架復合物分別植入6 月齡健康雌性山羊皮下，4周后行大體觀察、組織學染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色、生化分析以及RT-PCR檢測，綜合評估載藥支架的體內抗炎效果以及促進軟骨再生情況。結果 制備的載藥支架為白色多孔結構，具有豐富、連續且均勻的孔隙結構，孔徑及孔隙率與PLGA支架比較差異均無統計學意義（P>0.05）；FTIR光譜儀檢測示黃腐酚成功負載至PLGA支架。體外觀測示，載藥支架炎癥因子（IL-1β、TNF-α）基因及蛋白相對表達量均低于PLGA支架（P<0.05）；且隨培養時間延長活細胞明顯增多，各時間點與PLGA支架比較差異無統計學意義（P>0.05）。體外軟骨再生評價顯示，培養6周后，兩種BMSCs-支架復合物呈光滑、半透明淡黃色，并且能基本維持培養前形狀；組織學及免疫組織化學染色示支架中均出現典型的軟骨陷窩結構和軟骨特異性細胞外基質表達；軟骨特異性糖胺聚糖（glycosaminoglycan，GAG）和Ⅱ型膠原含量與BMSCs-PLGA支架復合物差異均無統計學意義（P>0.05）。體內軟骨再生評價顯示，植入羊體內4周后BMSCs-載藥支架復合物基本維持植入前形狀和大小，而BMSCs-PLGA支架復合物嚴重變形；BMSCs-載藥支架復合物具有典型的軟骨陷窩結構和軟骨特異性細胞外基質，且未出現明顯炎癥細胞浸潤；而BMSCs-PLGA支架復合物為雜亂的纖維狀結構，可見明顯炎癥反應。BMSCs-載藥支架復合物軟骨特異性GAG和Ⅱ型膠原含量均明顯高于BMSCs-PLGA支架復合物（P<0.05）；IL-1β、TNF-α基因相對表達量均低于BMSCs-PLGA支架復合物（P<0.05）。結論 載藥支架具有合適孔徑、孔隙率、細胞相容性和良好抗炎性能，聯合BMSCs植入羊體內后能促進軟骨再生。
目的研發一種具有抗炎作用的載雙氯芬酸鈉明膠多孔支架，為緩解再生軟骨組織植入體內后的炎癥反應及促進體內軟骨再生提供新的思路。方法將雙氯芬酸鈉與明膠混勻，通過凍干法制備載雙氯芬酸鈉明膠多孔支架作為實驗組，單純明膠多孔支架作為對照組。觀察支架大體形貌，掃描電鏡觀測支架孔徑，排水法計算支架孔隙率，傅里葉變換紅外光譜儀和X射線衍射儀檢測雙氯芬酸鈉負載情況，體外緩釋實驗檢測實驗組雙氯芬酸鈉釋放曲線。將兩組支架材料與脂多糖預激活的RAW264.7巨噬細胞體外共培養后，行RT-PCR、ELISA、Western blot檢測IL-1β和TNF-α的表達，評價支架體外抗炎性能。將新西蘭大白兔第2代軟骨細胞種植于兩組支架上進行體外培養，活/死細胞染色及細胞計數試劑盒8法檢測支架細胞相容性，行大體觀察、HE染色、番紅O染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色及生化成分定量分析驗證支架體外再生軟骨的可行性。最后將兩組軟骨細胞-支架復合物植入新西蘭大白兔皮下，4周后行大體觀察、HE染色、番紅O染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色及生化成分定量分析驗證體內軟骨再生情況，以及RT-PCR法檢測炎癥相關基因CD3和CD68的表達，綜合評估支架體內抗炎性能。 結果兩組支架均具有相似的外觀、微孔結構、孔徑和孔隙率，差異無統計學意義（P>0.05）；雙氯芬酸鈉作為藥物分子成功分散于明膠支架中；體外抗炎結果顯示，與單純明膠多孔支架比較，載雙氯芬酸鈉明膠多孔支架IL-1β和TNF-α的mRNA和蛋白相對表達量明顯降低（P<0.05）。體外軟骨再生評價顯示，隨培養時間延長活細胞明顯增多，各時間點兩組支架比較差異無統計學意義（P>0.05）；兩組支架均再生出白色軟骨樣組織，組織學觀察呈典型的軟骨陷窩結構和特異性軟骨細胞外基質分泌，軟骨特異性糖胺聚糖（glycosaminoglycan，GAG）和Ⅱ型膠原含量差異均無統計學意義（P>0.05）。體內實驗表明，實驗組樣本呈瓷白色軟骨樣形貌，組織學染色呈明顯的軟骨陷窩結構和軟骨特異性細胞外基質，GAG和Ⅱ型膠原含量明顯高于對照組，CD3和CD68的蛋白和mRNA相對表達量明顯低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。結論載雙氯芬酸鈉明膠多孔支架具有合適的孔徑、孔隙率、細胞相容性和良好抗炎性能，為緩解再生軟骨組織植入體內后的炎癥反應并促進體內軟骨再生提供了可靠方案。
目的探討基于肌肉脫細胞基質（acellular musclar matrix，AMM）制備雙重交聯可注射水凝膠用于促進肌母細胞增殖和成肌分化的可行性。方法先將透明質酸通過高碘酸鈉氧化處理并甲基化制備甲基丙烯酰胺氧化透明質酸（methacrylamidated oxidized hyaluronic acid，MOHA）水凝膠；再采用洗滌酶法獲得AMM，并經氨基活化以制備氨基化AMM（aminated AMM，AAMM）。將MOHA水凝膠和AAMM通過席夫堿反應和紫外光交聯，制備一種雙重交聯可注射的MOHA/AAMM水凝膠。采用傅立葉變換紅外吸收光譜儀（Fourier transform infrared spectroscopy，FTIR）分別對MOHA、AAMM和MOHA/AAMM水凝膠樣品進行表征；通過手動注射和紫外光交聯分別檢測MOHA/AAMM水凝膠的可注射性和成膠性能；采用力學測試檢測水凝膠的流變性能和楊氏模量，并將水凝膠浸沒于PBS中15 d檢測其降解性能。通過免疫熒光染色和ELISA法檢測水凝膠的活性成分。將MOHA和MOHA/AAMM水凝膠分別與C2C12肌母細胞體外共培養9 d，通過活/死細胞染色和細胞計數試劑盒8（cell counting kit 8，CCK-8）法檢測水凝膠促進肌母細胞的增殖作用，通過免疫熒光染色和定量聚合酶鏈反應（real time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）檢測水凝膠促進肌母細胞的成肌分化能力。結果FTIR圖譜示MOHA/AAMM水凝膠成功制備，且表現出良好的可注射性和成膠能力。相較于MOHA水凝膠，MOHA/AAMM水凝膠具有更高的黏度和楊氏模量，更緩慢的降解速率，并且含有更多膠原蛋白（包括Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原）和生物活性因子（包括EGF、FGF-2、VEGF和IGF-1），差異有統計學意義（P<0.05）。活/死細胞染色和CCK-8檢測示，MOHA/AAMM水凝膠中C2C12肌母細胞隨培養時間延長活細胞明顯增多且死細胞減少，各時間點與MOHA組比較差異有統計學意義（P<0.05）。免疫熒光染色和RT-qPCR檢測示，相較于MOHA水凝膠，MOHA/AAMM水凝膠中IGF-1沉積量和成肌相關基因（肌原蛋白、肌鈣蛋白T和肌球蛋白）表達量顯著提高，差異有統計學意義（P<0.05）。 結論基于AMM制備的MOHA/AAMM水凝膠可以促進肌母細胞增殖和成肌分化，為肌肉組織工程提供一種新的雙重交聯可注射水凝膠。