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      華西醫學期刊出版社
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      找到 作者 包含"潘晴" 1條結果
      • 慢病毒介導的雙干擾RNA同時沉默IGF1R和EGFR蛋白治療肝癌的實驗研究

        目的 研究雙靶向IGF1R和EGFR基因的小干擾RNA(siRNA)慢病毒對肝癌細胞SMMC7721中IGF1R和EGFR表達的影響及其對細胞生長的作用。方法 針對已經篩選確定的IGF1R和EGFR基因干擾有效序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成雙鏈DNA,與pLVTHM載體連接產生pLVTHM-IGF1R。RT-PCR合成含H1啟動子EGFR-siRNA表達框,克隆入pLVTHM-IGF1R中形成pLVTHM-IGF1R-EGFR-siRNA。用pLVTHM-IGF1R-EGFR-siRNA、psPAX2和pMD2G 3質粒共轉染包裝細胞293T細胞,包裝產生慢病毒LVTHM-IGF1R-EGFR-siRNA,大量擴增,氯化銫梯度離心純化,測病毒滴度。用LVTHM-IGF1R-EGFR-siRNA感染SMMC7721細胞(感染組),以未經處理的SMMC7721細胞(細胞對照組)及空載體質粒LVTHM(空載體對照組)作為對照。RT-PCR及Western blot法檢測細胞中IGF1R和EGFR的表達,Cell Counting Kit-8法檢測細胞生長,TUNEL法檢測細胞凋亡。結果 成功構建慢病毒LVTHM-IGF1R-EGFR-siRNA; 病毒滴度為4.58×109 pfu/ml; LVTHM-IGF1R-EGFR-siRNA明顯抑制肝癌細胞中IGF1R和EGFR的mRNA和蛋白的表達,分別為細胞對照組及空載體對照組的5%、4%和4%、3%以及10%、11%和8%、9%(P<0.05),同時能抑制肝癌細胞生長(P<0.05),促進肝癌細胞凋亡(P<0.05)。結論 靶向IGF1R和EGFR基因siRNA慢病毒可同時有效封閉肝癌細胞中的IGF1R及EGFR,降低肝癌細胞的增殖能力,為以IGF1R和EGFR基因為靶點的肝癌生物治療奠定了理論基礎。

        發表時間:2016-09-08 11:05 導出 下載 收藏 掃碼
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      小泉真希