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      華西醫學期刊出版社
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      找到 關鍵詞 包含"Pax6基因" 1條結果
      • Pax6基因轉染對脂肪來源間充質干細胞的誘導分化研究

        目的探討應用Pax6基因轉染誘導脂肪來源間充質干細胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)分化為角膜上皮樣細胞的可行性。 方法取健康5~6周齡C57BL/6小鼠雙側腹股溝脂肪,分離、培養ADMSCs,取第3代細胞進行基因轉染。設未轉染組(A組)、pcDNA3.1空質粒組(B組)和pcDNA3.1-Pax6重組質粒組(C組),轉染48 h后取B、C組進行G418篩選,倒置顯微鏡下觀察細胞形態學改變;Western blot檢測各組Pax6蛋白以及角膜上皮細胞特異性標志分子——細胞角蛋白12(cytokeratin 12,CK-12)表達;實時熒光定量PCR檢測各組CK-12 mRNA表達。 結果A、B組細胞形態無改變;C組篩選出兩類不同形狀的細胞克隆,一類呈“鋪路石”狀,形態類似角膜上皮細胞,命名為篩選克隆1;另一類呈網狀,有3~7個細胞突起,命名為篩選克隆2。Western blot檢測示,A、B組Pax6蛋白表達均為陰性,C組兩類細胞克隆均有Pax6蛋白表達;僅C組篩選克隆1 CK-12蛋白表達為陽性,其余3組均為陰性。實時熒光定量PCR檢測示,C組篩選克隆1的CK-12 mRNA相對表達量為8.64±0.73,高于篩選克隆2(0.55±0.42)、B組(1.36±0.40)和A組(1.00±0.00)(P<0.05);A、B組以及C組篩選克隆2比較差異均無統計學意義(P>0.05)。 結論Pax6基因轉染能夠誘導小鼠ADMSCs分化為角膜上皮樣細胞,同時促進CK-12表達,為組織工程角膜構建提供了一種有效的上皮細胞來源。

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      小泉真希