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      華西醫學期刊出版社
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      找到 關鍵詞 包含" 分化" 1條結果
      • 直接貼壁法誘導人胚胎干細胞分化為心肌細胞

        目的 利用直接貼壁法體外誘導人胚胎干細胞分化為心肌細胞,并檢測其分化效率。 方法 人胚胎干細胞以1×105個/cm2的細胞密度傳代到鋪備有基質膠的培養皿中培養,用帶8 ng/ml堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的條件培養基培養6 d后,更換為RPMI 1640-B27培養基,同時加入100 ng/ml的人重組activin A處理24 h,接著再加入10 ng/ml的人重組骨形態發生蛋白4 (BMP4) 處理4 d,之后更換為不帶誘導因子的RPMI 1640-B27培養基,每隔2~3 d換1次培養基,持續2~3周。在光學顯微鏡下觀察記錄出現跳動心肌細胞的時間和跳動頻率,并計算跳動克隆百分比,24孔板一組,共記錄4組96孔;用免疫熒光染色法檢測心肌細胞特異標志物心肌肌鈣蛋白T (cTnT);膜片鉗實驗檢測心肌細胞自發性動作電位;跳動心肌細胞經過24 h缺氧刺激后,用凋亡試劑盒檢測心肌細胞凋亡比例。結果 大量的自發跳動心肌細胞在誘導分化13 d左右開始出現。分化出現自發跳動心肌細胞的時間為(13.0±1.1) d,百分比為66.7%,跳動頻率為(63.0±7.0)次/分;跳動心肌細胞cTnT染色陽性;跳動心肌細胞檢測到自發性動作電位;跳動心肌細胞缺氧24 h后檢測到凋亡比率為8.0%±0.5%。 結論 國內首次利用直接貼壁法在體外誘導人胚胎干細胞分化為心肌細胞,分化效率達到66.7%,分化時間13 d左右。

        發表時間:2016-08-30 05:47 導出 下載 收藏 掃碼
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      小泉真希