巨噬細胞和（或）小膠質細胞參與了炎癥反應、病理性血管生成及損傷組織的修復過程，其活化狀態和不同的功能表型影響著缺血性視網膜疾病以及免疫性、腫瘤性眼部疾病的轉歸及預后。在疾病進展的過程中加以合理干預，扭轉其極性分化（極化）失衡狀態，將有可能為缺血性視網膜疾病和眼部免疫性疾病提供新的治療策略。而巨噬細胞和（或）小膠質細胞在缺血性視網膜疾病炎癥反應及病理性血管生成中極化方向的雙重性仍存在爭議，其功能的可塑性及多樣性有待進一步研究和探討。
目的觀察G蛋白抑制性α亞單位（Gαi）1和Gαi3對神經軸突導向因子-1（NTN1）誘導的信號轉導和血管生成的影響，探討其可能機制。方法采用隨機數字表法將20只6～8周齡雄性C57BL/6J小鼠隨機分為正常對照組、糖尿病組，每組各10只。糖尿病組通過腹腔注射鏈脲佐菌素建立糖尿病小鼠模型。造模12周后采用實時定量聚合酶鏈反應、蛋白質免疫印跡法檢測各組小鼠視網膜中Ntn1、Gαi1、Gαi3的mRNA和蛋白相對表達量。采用隨機數字表法將35只2周齡雄性C57BL/6J小鼠隨機分為正常對照組、玻璃體腔注射NTN1組（NTN1組）、視網膜內皮細胞Gαi1/Gαi3特異性敲低+玻璃體腔注射NTN1組（Gαi1/Gαi3 eKD+NTN1組），其中正常對照組、NTN1組每組各15只，Gαi1/Gαi3 eKD+NTN1組5只。采用同工凝集素B4染色法觀察各組小鼠視網膜新生血管形成情況。將體外培養的人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）分為陰性對照慢病毒組（shC組）、陰性對照慢病毒+NTN1處理組（shC+NTN1組）、Gαi1/Gαi3敲低組（shGαi1/Gαi3組）、Gαi1/Gαi3敲低+NTN1處理組（shGαi1/Gαi3+NTN1組）。采用EdU染色檢測NTN1、Gαi1、Gαi3對HUVEC增殖的影響；Transwell實驗測定NTN1、Gαi1、Gαi3對HUVEC遷移能力的影響；Matrigel實驗檢測NTN1、Gαi1、Gαi3對HUVEC管腔形成能力的影響。采用蛋白質免疫印跡法檢測HUVEC中蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、核糖體蛋白S6激酶（S6K）、磷酸化S6K（p-S6K）、細胞外調節蛋白激酶（Erk1/2）、磷酸化Erk1/2（p-Erk1/2）蛋白表達量。兩組間比較采用t檢驗；三組間比較采用單因素方差分析；多因素比較采用事后Dunnett檢驗。結果與正常對照組比較，糖尿病組小鼠視網膜組織中Ntn1、Gαi1、Gαi3 mRNA和蛋白相對表達量顯著增加，差異有統計學意義（t=11.800、9.298、10.620、7.503、3.432、8.037，P＜0.000 1）。與shC組比較，shGαi1/Gαi3組HUVEC中Gαi1、Gαi3 mRNA和蛋白相對表達量顯著降低，差異有統計學意義（t=16.310、16.300、13.600、9.068，P＜0.000 1）。HUVEC增殖率、遷移數量、管腔形成數量：與shC組比較，shC+NTN1組顯著增加，而shGαi1/Gαi3組及shGαi1/Gαi3+NTN1組顯著減少，差異均有統計學意義（F=62.750、49.830、54.900，P＜0.000 1）。與正常對照組比較，Gαi1/Gαi3 eKD+NTN1組視網膜中Gαi1、Gαi3 mRNA和蛋白相對表達量顯著下降，差異有統計學意義（t=10.920、13.460、9.219、10.500，P＜0.000 1）。視網膜新生血管形成面積：與正常對照組相比，NTN1組顯著增加，而Gαi1/Gαi3 eKD+NTN1組顯著減小，差異均有統計學意義（F=24.010，P＜0.000 1）。p-Akt相對Akt、p-S6K相對S6K、p-Erk1/2相對Erk1/2蛋白相對表達量：與shC組相比，shC+NTN1組顯著增加，而shGαi1/Gαi3組及shGαi1/Gαi3+NTN1組顯著降低，差異均有統計學意義（F=78.610、144.400、77.010，P＜0.000 1）。結論NTN1誘導Gαi1/Gαi3介導下游Akt-哺乳動物雷帕霉素靶蛋白和Erk1/2的激活，從而在體內和體外環境中促進血管生成。敲低Gαi1/Gαi3能夠顯著減少NTN1誘導的血管生成效應。