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      華西醫學期刊出版社
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      找到 作者 包含"胡羽生" 1條結果
      • M2型小膠質細胞移植促進小鼠脊髓損傷修復的實驗研究

        目的 探討M2型小膠質細胞(M2 microglia,M2-MG)移植促進小鼠脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)修復的效果。方法 取15只新生2~3 d C57BL/6乳鼠大腦皮質,通過胰蛋白酶消化法分離原代細胞并進行Iba1免疫熒光染色鑒定為MG后,以IL-4極化誘導培養48 h(實驗組),通過精氨酸酶 1(Arginase 1,Arg-1)、Iba1免疫熒光染色鑒定其是否極化為M2-MG;以正常培養MG作為對照組。另取5只新生1周C57BL/6乳鼠背根神經節(dorsal root ganglion,DRG)與M2-MG共培養5 d,觀測軸突長度;以單純DRG作為對照。取42只6周齡雌性C57BL/6小鼠隨機分為假手術組(n=6)、SCI組(n=18)及SCI+M2-MG組(n=18)。手術暴露脊柱T10節段后,假手術組僅切除椎板,SCI組及SCI+M2-MG組行SCI造模后,SCI+M2-MG組同時注射M2-MG。術后觀測各組小鼠存活情況,并于術后當天(0)、3、7、14、21、28 d采用BMS(Basso Mouse Scale)評分評價小鼠運動功能恢復情況,28 d行足跡實驗評價小鼠步態。術后取SCI組及SCI+M2-MG組脊髓組織行免疫熒光染色,其中7、14、28 d 膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)染色觀測SCI損傷區域面積,28 d 神經元核抗原染色觀察神經元存活情況,7、14 d GFAP/C3雙重熒光染色觀察表示A1星形膠質細胞數量變化。結果 免疫熒光染色鑒定體外培養細胞為MG且純度可達90%,經IL-4誘導培養后Arg-1免疫熒光染色示極化為M2表型。M2-MG與DRGs體外共培養5 d后可促進軸突生長(P<0.05)。動物實驗示,術后各組小鼠均存活至實驗完成。SCI組及SCI+M2-MG組小鼠術后后肢運動功能隨時間延長逐漸恢復,其中21、28 d SCI+M2-MG組BMS評分較SCI組更高(P<0.05),28 d時拖曳步態明顯減輕,但尚未達假手術組水平。免疫熒光染色示,與SCI組相比,SCI+M2-MG 組在7、14、28 d損傷區域面積均縮小,28 d時存活神經元數量增加,7、14 d時A1星形膠質細胞減少,差異均有統計學意義(P<0.05)。結論 M2-MG移植可促進小鼠SCI神經元存活和軸突再生,改善小鼠后肢運動功能,分析這種神經保護作用與A1星形膠質細胞極化被抑制有關。

        發表時間:2024-02-20 04:11 導出 下載 收藏 掃碼
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      小泉真希